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丙二醛(MDA)终点比色法定量检测试剂盒产品说明书

丙二醛(MDA)终点比色法定量检测试剂盒产品说明书 主要用途 丙二醛(MDA)终点比色法定量检测试剂是一种旨在通过TBARS(硫代巴比妥酸反应物)技术,检测与之反应的丙二醛,其产物丙二醛双硫代巴比妥酸加合物,在分光光度仪下,检测其吸光峰值的变化,即采用比色法测定样品中总丙二醛含量的权威而经典的技术方法。该技术由大师级科学家精心研制、成功实验证明的。其适用于各种动物、人体等细胞、组织、血液、体液、培养液丙二醛的含量检测。广泛用于细胞氧化应急研究,特别是脂质过氧化的分析。产品严格无菌,即到即用,操作简捷,性能稳定,重复性好。 技术背景 脂质过氧化反应(lipid peroxidation;LPO)是动物和植物细胞损伤的一种机制,也是评价细胞和组织氧化应急的标志。含有两个或以上双键(double bond)的多不饱和脂肪酸(Polyunsaturated Fatty Acid)对自由基以及其它活性氧化族高度敏感,导致产生脂质过氧自由基LOO+(lipid peroxyl radical),使脂类氧化(lipid oxidation)。脂质过氧化自由基LOO+同时通过攻击分子内双键,经环化、裂解形成环状内过氧化物(cyclic endoperoxide),例如丙二醛(malondialdehyde;MDA)。作为脂质过氧化性低分子量终端产物之一的丙二醛,广泛用于脂质过氧化反应的指标。在丁羟甲苯(Butylated Hydroxytoluene;BHT)和EDTA的参与帮助减少干扰性脂类氧化的情况下,丙二醛与硫代巴比妥酸(thiobarbituric acid;TBA)进行反应,产生丙二醛双硫代巴比妥酸加合物(MDA-TBA2),通过分光光度仪(532nm波长)来定量分析丙二醛的含量,其反应方式为: malondialdehyde +2 thiobarbituric acid → MDA-TBA2 产品内容 抗干扰液(Reagent A) 500微升 萃取液(Reagent B) 1.25毫升 反应液(Reagent C) 5管 补充液(Reagent D) 10毫升 稀释液(Reagent E) 1.5毫升 产品说明书 1份 保存方式 保存在4℃冰箱里,抗干扰液(Reagent A)和反应液(Reagent C)避免光照,并密封;萃取液(Reagent B)具有腐蚀性,注意操作安全;有效保证6月 用户自备 恒温培养箱:用于反应孵育 酶标板:用于比色的容器 酶标仪:用于样品比色分析 实验步骤 实验开始前,将试剂盒中的反应液(Reagent C) 置入冰槽里。移取250微升稀释液(Reagent E)到 反应液(Reagent C)管里,涡旋混匀,标记为反应工作液(10次操作量)。同时设定好酶标仪(温度为25℃):波长532nm,并置零。然后进行下列操作。 1.准备好1个96酶标板孔,并做好相应标记:背景对照和样品 2.分别移取140微升补充液(Reagent D) 3.分别加入10微升抗干扰液(Reagent A) 4.分别加入50微升补充液(Reagent D)或待测样品(注意:总量为1至2毫克总蛋白) 5.用枪头混匀 6.分别加入25微升萃取液(Reagent B) 7.用枪头混匀 8.分别加入25微升反应工作液 9.轻轻摇动酶标板,混匀 10.放进60℃恒温培养箱,孵育60分钟 11.放进酶标仪检测 12.样品实际读数:(样品读数-背景对照读数) 13.计算样品总浓度 [样品实际读数X样品稀释倍数X 0.25(毫升,测定容量)]÷[0.05(样品容量,毫升)X 156(毫摩尔吸光系数)X 0.6]=微摩尔/毫升÷(样品蛋白浓度)毫克/毫升=微摩尔/毫克 注意事项 1.本产品为50次(96孔板)操作 2.操作时,须戴手套 3.萃取液(Reagent B)具有腐蚀性,注意操作安全 4.反应液(Reagent C)为固体,避免在室温下放置;配制后,有效期1周 5.抗干扰液(Reagent A)和反应液(Reagent C)避免光照,并密封 6.本产品检测敏感度可达0.05微摩尔丙二醛 7.50微摩尔的过氧化氢会干扰检测(使丙二醛减少13%);而蔗糖和果糖则不影响检测 8.如果样品含有过高的蛋白成分,建议进行样品去蛋白处理 9.如果待测样品浓度过高或过低,可以调整样品浓度 10.正常样品的丙二醛浓度相当低,约在皮摩尔水平,即10至100皮摩尔/毫克蛋白 11.本公司提供系列丙二醛检测试剂产品 质量标准 1.本产品经鉴定性能稳定 2.本产品经鉴定检测敏感

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