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详细信息

【病理平台】组织免疫荧光(IF)---双标

实验原理
免疫荧光技术是根据抗原抗体反应的原理,先将已知的抗原或抗体标记上荧光素,再用这种荧光抗体(或抗原)作为探针检查组织内的相应抗原(或抗体)。在组织中形成的抗原抗体复合物上含有标记的荧光素,荧光素受激发光的照射,由低能态进入高能态,而高能态的电子是不稳定的,以辐射光量子的形式释放能量后,再回到原来的低能态,这时发出明亮的荧光,利用荧光显微镜可以看见荧光所在的组织,从而确定抗原或抗体的性质和定位,以及利用定量技术测定含量。免疫荧光技术分直接法、间接法和补体法,最常见的为间接法。

实验步骤
(1)石蜡切片脱蜡至水,或者制作的冰冻切片用冷丙酮在4℃固定10-20分钟;
(2)抗原修复,冰冻切片无需修复;
(3)用0.01M PBST漂洗3次,每次5 min;
(4)滴加正常的血清室温封闭30 min;
(5)加未标记的特异性抗体,4℃过夜;
(6)用0.01M PBST漂洗3次,每次5 min(震荡漂洗);
(7)加荧光标记的二抗抗体,37℃湿盒避光作用30 min;
(8) 0.01M PBST避光漂洗3次,每次5 min;
(9)甘油缓冲液封片;
(10)荧光显微镜观察。

注意事项

1.需要使用不同来源的一抗

2.荧光有衰减,寄回或者重拍都可能有荧光消失的现象,建议客户在下单时增加拍照张数。

3.做石蜡包埋样本保存及运输:常温置于4%多聚甲醛固定液内保存及运输(需注意固定液的量最好是组织的10倍以上,样本需完全浸泡于固定液内并防止样本贴壁固定不良,大标本最好使用大的标本瓶/袋运输,建议在大标本上按取材包埋要求做多条平行切口,以防标本中心固定不透彻。运输过程中防止固定液渗漏)。
4.做冰冻切片样本保存及运输:-80℃或液氮长期保存,干冰运输。

实验结果展示

 
 
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