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详细信息

【分子平台】甲基化检测

 实验原理

DNA甲基化存在于大多数真核生物中,一般发生在CpG双核苷酸中胞嘧啶的5’UTR区,起调控作用。CpG的胞嘧啶大概有80%被甲基化,20%处于基 因调控区的CpG岛中。BSP甲基化测序(Bisulfite Genomic Sequencing PCR)的原理通过对基因组DNA进行重亚硫酸盐处理,非甲基化的胞嘧啶被脱氨基而转变成尿嘧啶,在随后的PCR反应中尿嘧啶转变成胸腺嘧啶,而甲基化的 胞嘧啶不能被脱氨基,在反应完成时被保留,我们将扩增得到的PCR产物进行TA克隆测序,就可以分析甲基化发生的具体情况。该方法实验结果准确 性高,是甲基化检测的金标准。

实验流程

 

甲基化检测.png

 

 

甲基化.png

 

 

 

注意事项

①组织样本提供黄豆大小即可,细胞样本提供10^5的细胞数

②速冻后的新鲜组织、细胞,DNA样本量>7μg,干冰运输

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